Будьте здоровы!

Структурные белки вируса гепатита с



Белки и антигены вируса гепатита С. Диагностика ВГС

Сегодня известно минимум 10 структурных и неструктурных белков. кодируемых геномом HCV. К структурным белкам относят core, envelop 1 и envelop 2. Белок core является белком нуклеокапсида, тогда как envelop 1 и envelop 2 — гликопротеины внешней оболочки вируса. В структурной зоне кодируется также белок р7, функция которого не ясна, однако аналогия с другими представителями семейства Flaviviridae позволяет предположить, что его функция связана с высвобождением вириона из инфицированной клетки.
Этот белок отщепляется клеточной пептидазой от envelop 2, но не во всех случаях, что обусловливает существование envelop 2 в виде двух форм более и менее протяженной.

Неструктурная область генома HCV кодирует 6 белков — NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A и NS5B. Белок NS2 является вирусной металлозависимой протеиназой. Белок NS4A действует как эффектор или кофактор для NSЗ-протеолитической активности в NS4A/NS4B, NS4B/NS5A, NS5A/NS5B сайтах нарезания полипротеина вируса.

В настоящее время фрагменты структурных и неструктурных белков, полученных генноинженерным путем (рекомбинантные белки) или с помощью химического синтеза, используют в качестве антигенов при конструировании иммуноферментных тест-систем. Первое поколение иммуноферментных тест-систем появилось на рынке в 1989 году и было основано на прямом ИФА. В качестве иммуносорбента были использованы фрагменты двух белков, NS3 и NS4, обозначаемых как 5-1-1 и С100-3.

Одновременно были разработаны и подтверждающие тесты на основе иммуноблота с рекомбинантными белками (RIBA). Чувствительность этих тест-систем первого поколения составляла только 64% для ИФА и 55% для иммуноблота. Тест-системы второго поколения появились на рынке в 1991 году. В качестве антигенов, сорбированных на твердой фазе, в этих тест-системах использовали капсидные белки (фрагмент с22-3) и антигены неструктурных регионов NS3 (фрагменты с200 и сЗЗс) и NS4, что позволило повысить чувствительность и специфичность исследований. Поскольку гуморальный иммунный ответ на капсидные антигены (структурные белки) нагинается быстрее, гем на неструктурные белки, период от инфицирования до выявляемой сероконверсии удалось уменьшить до двух месяцев.

Подтверждающие тест-системы на основе иммуноблота позволяли идентифицировать участвующие в реакции антигены. Результаты, полученные при помощи этих тест-систем, интерпретировали как положительные лишь при реакции антител, находящихся в исследуемом субстрате, по крайней мере, с двумя антигенами, тогда как при наличии реакции лишь с одним из антигенов результат считали неопределенным. Было установлено, что специфичность второго поколения тест-систем зависела от источника антигенов. В 1993 году на рынке появилось третье поколение тест-систем. В дополнение к вышеупомянутым антигенам в этих тест-системах используются также антигены, аминокислотная последовательность которых соответствует иммунодоминантным участкам NS5 белков.

В тест-системах первого, второго и третьего поколений в качестве антигенов использовались или рекомбинантные, или синтетические пептиды. В настоящее время можно выделить также тест-системы четвертого поколения, в которых в качестве иммуносорбента используют сочетания рекомбинантных и синтетических пептидов.

Опыт применения тест-систем различных поколений в мире очень большой. Было установлено, что если с помощью тест-систем первого или второго поколения у больных с острым вирусным гепатитом С антитела выявляли на 10-16, а в ряде случаев и 25-30 неделе от начала заболевания, то диагностикумы третьего поколения позволяли сократить этот срок до 2-3 недель. Согласно обобщенным данным чувствительность тест-систем первого, второго и третьего поколений составляет соответственно 70-80%, 92-95% и 97%.

В то же время, по данным С. Colin, 2001, чувствительность тест-систем третьего поколения составила 98,9% у пациентов с хроническими заболеваниями печени и 97,2% на специальных контрольных панелях сывороток. Достижение высокой чувствительности иммуноферментных тест-систем 3 и 4 поколения сопряжено с некоторыми проблемами в обеспечении специфичности исследований, что в ряде случаев может приводить к появлению ложноположительных результатов. В литературе имеются данные о возможных погрешностях в специфичности ELISA 3 тест-систем. Они являются общими для всех ELISA тест-систем, включая тест-системы для диагностики СПИДа.

Ложнопозитивные результаты могут быть следствием повышенного содержания в образцах гамма-глобулинов (сыворотки пациентов африканской расы, миеломная болезнь, ревматоидные факторы), заболеваний печени (цирроз, рак), аутоиммунных заболеваний (коллагенозы, аутоиммунные гепатиты), других вирусных инфекций (ВИЧ, гепатит В) и длительного хранения сывороток в меняющихся температурных условиях. Проведение какой-либо иммунизации также может сопровождаться повышением частоты ложнопозитивных реакций. Рекомендуемые в настоящее время меры по устранению этой проблемы следующие: а) повторная постановка образца в этой же ИФТС; б) повторная детекция anti-HCV в другой ИФТС; в) использование подтверждающих тестов на основе ИФА и иммуноблота.

Однако использование предлагаемых способов подтверждения результатов зачастую приводят к расхождениям в их итоговой трактовке, что показано исследованиями российских и зарубежных исследователей.

В настоящее время производители ИФТС для детекции anti-HCV достигают высокой чувствительности или за счет более полного выявления антител к NS3 или антител к антигенам core. Сравнительные исследования, выполненные на различных группах риска и специальных контрольных панелях показали, что тест-системы, лучше выявлявшие антитела к NS3, оказались несколько более чувствительными, чем тест-системы, лучше выявлявшие антитела к антигенам core. Их чувствительность составляла, соответственно 99,9% и 98,6%.

Hepatitis C virus (HCV, гепатит C), структурные и неструктурные белки, антитела, качественный, кровь

Подготовка к исследованию: Исключение курения за 30 минут до забора крови Исследуемый материал: Взятие крови Как сдавать анализ крови без боли?

Гепатит С - инфекционное заболевание, вызванное РНК вирусом гепатита С. Существует шесть генотипов вируса гепатита С, которые разделены на подтипы.
Гепатит С характеризуется воспалением и повреждением печени. Инфекция гепатита С часто протекает безсимптомно, но хроническое течение заболевания может привести к циррозу печени. В некоторых случаях возможно развитие рака печени и опасного для жизни варикозного расширения вен пищевода и желудка.

Около 150-200 миллионов человек заражены гепатитом С. Гепатит С - причина 27% случаев цирроза печени и 25% случаев гепатоцеллюлярной карциномы (рака печени).

Основной путь передачи инфекции в развитых странах - внутривенное употребление наркотиков. В развивающихся странах вирус передается чаще при переливании крови и медицинских процедурах, а также при татуаже. В 20% случаев причина заражения остается невыясненной. Возможные пути передачи гепатита С - пересадка органов и костного мозга, вертикальный путь - от матери ребенку во время родов. В редких случаях гепатит С может передаваться при незащищенных половых контактах, а также совместном использовании средств личной гигиены (бритва, зубная щетка).

Гепатит С сопровождается острой симптоматикой лишь в 15% случаев. Проявления, как правило, мягкие - снижение веса, потеря аппетита, тошнота, мышечные боли, боли в суставах, усталость. У приблизительно 85% инфицированных заболевание переходит в хроническую форму. Обычно хронический гепатит С протекает без клинических проявлений в течение первых десяти лет. Жировые изменения в печени наблюдаются примерно у 50% больных и определяются перед развитием цирроза.

Распространенность гепатита С у иммунокомпрометированных лиц гораздо выше, чем у здоровых людей. Гепатит С у ВИЧ-инфицированных, реципиентов органов, а также при гипогаммаглобулинемии (снижении уровня иммуноглобулинов) отличается быстрым течением и переходом в цирроз печени.

Предполагается, что 5-50% инфицированных вирусом гепатита С не знают о своем статусе. Тестирование рекомендовано группам риска - лицам, употребляющим внутривенные наркотики, а также реципиентам крови (обязательно в случае гемотрансфузии, проведенной до 1992 года,) и лицам, имеющим татуировки. Скрининг также рекомендован при повышении уровня печеночных трансаминаз.

При инфицировании вирусом гепатита С синтезируются антитела к нескольким антигенам вируса. Через 6-8 недель после инфицирования вырабатываются иммуноглобулины к структурным белкам вируса гепатита С, к которым относится сердцевинный core-антиген. Позже, в течение нескольких недель после выработки первых антител, в крови появляются антитела к неструктурным белкам - NS2, NS3, NS4, NS5. Выявление антител сразу к нескольким антигенам вируса гепатита С повышает диагностическую ценность метода.

Данный анализ позволяет выявить антитела к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С. Анализ помогает диагностировать гепатит С.

Метод

Иммуно-ферментный анализа - ИФА

В ответ на попадание в организм человека инородных частиц, таких, как вирусы, иммунная система вырабатывает иммуноглобулины — защитные антитела. Эти антитела выявляют специальным анализом методом ИФА, скрининговым исследованием, используемым для установления факта инфицирования человека вирусом гепатита С. Для гепатита С все антитела содержат аббревиатуру anti-HCV, что означает против вируса гепатита С .


Антитела гепатита С бывают двух классов — G и M, что в анализах пишется, как IgG и IgM (Ig –immunoglobulin (иммуноглобулин) — это латинское название антител). Anti-HCV total (anti-НСV, анти-hcv) — суммарные антитела (классов IgG и IgM) к антигенам вируса гепатита C. Тест на определение этих маркеров проводится всем пациентам, когда хотят проверить, есть ли у них гепатит С. Anti-HCV присутствуют как при остром (они могут обнаруживаться уже с 4 - 6 недели после инфицирования), так и при хроническом гепатите. Anti-HCV total также встречаются у тех, кто переболел гепатитом С и выздоровел самостоятельно. У таких людей данный маркер может обнаруживаться в течение 4 - 8 и более лет после выздоровления.


Поэтому положительный анализ на anti-HCV не является достаточным для того, чтобы установить диагноз. На фоне хронической инфекции суммарные антитела выявляются постоянно, а после успешного лечения сохраняются длительное время (прежде всего за счет anti-HCV core IgG, о них написано ниже), при этом их титры постепенно снижаются.


Спектр anti-НСV (core, NS3, NS4, NS5) — это специфические антитела к отдельным структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С. Их определяют для суждения о вирусной нагрузке, активности инфекции, риске хронизации, разграничении острого и хронического гепатита, степени поражения печени. Обнаружение антител к каждому из антигенов имеет самостоятельное диагностическое значение. Anti-HCV состоят их структурных (core) и неструктурных (NS3, NS4, NS5) белков (протеинов).


Anti-HCV core IgG —антитела класса G к ядерным (core) белкам HCV. Anti-HCV IgG появляются с 11-12 недели после инфицирования, поэтому для диагностики возможных свежих случаев инфицирования используют Anti-HCV total, которые появляются раньше. Anti-HCV IgG достигают пика концентрации к 5 - 6 месяцу с момента инфицирования и при хроническом течении болезни выявляются в крови пожизненно. При перенесенном гепатите С титр антител класса IgG постепенно снижается и может достигнуть неопределяемых величин через несколько лет после выздоровления.


Неструктурные (NS3, NS4, NS5) белки.

NS3, NS4, NS5 относятся к неструктурным (NS — nonstructural) белкам. На самом деле, этих белков больше — NS2, NS3, NS4a, NS4b, NS5a, NS5b, однако в большинстве клинико-диагностических лабораторий определяют антитела к белкам NS3, NS4 и NS5.


Anti-NS3 выявляются на самых ранних этапах сероконверсии. Высокие титры anti-NS3 характерны при остром гепатите С и могут являться самостоятельным диагностическим маркером острого процесса. При остром процессе высокая концентрация anti-NS3 обычно свидетельствует о значительной вирусной нагрузке, а длительное сохранение их в острой фазе связано с высоким риском хронизации инфекционного процесса.


Anti -NS4 и anti-NS5, как правило, появляются в более поздние сроки. При ХВГС определение anti-NS4 в высоких титрах может свидетельствовать о длительности инфекционного процесса и, по некоторым данным, имеет связь со степенью поражения печени. Выявление anti-NS5 в высоких титрах часто свидетельствует о присутствии вирусной РНК, а в острой стадии является предиктором хронизации инфекционного процесса. Снижение титров NS4 и NS5 в динамике может являться благоприятным признаком, указывающим на формирование клинико-биохимической ремиссии. Титры anti-NS5 могут отражать эффективность ПВТ, причем их повышенные значения характерны для лиц, не отвечающих на терапию. После выздоровления титры anti-NS4 и anti-NS5 снижаются с течением времени. Результаты одного из исследований показали, что почти у половины пациентов через 10 лет после успешного лечения интерферонами, anti-NS4 и anti-NS5 не определялись. В следующей таблице приведены наиболее вероятные варианты трактовки сочетания маркеров гепатита С.

Подготовка пациента: Сдача крови натощак.

Стабильность пробы: не более 3 суток при температуре 2-8 C при условии отсутствия микробной контаминации и не более 3 месяцев при температуре -20 C. Замораживать не более одного раза.

Анализатор: Sinnowa ER-500.

Тест – система: VitroTest.

Референсные значения (норма):

Источники: http://meduniver.com/Medical/zabolevania_pecheni/belki_i_antigeni_virusa_gepatita_c.html, http://www.analizmarket.ru/tests/id/4536, http://newdiagnostics.ua/index.php?Itemid=275id=275option=com_contentview=article




Комментариев пока нет!

Поделитесь своим мнением

Интересное на сайте

Лечение цистита и уретрита у детей

Лечение цистита и уретрита клюквой Вы будете удивлены, далее...

Перфорация кишечника при колоноскопии симптомы

Мы решили вынести вопрос перфорации толстой далее...

Боль в желудке отравление лечение

Чем и как снять тошноту при отравлении? Тошнота далее...

Наиболее читаемое

Колонотерапия кишечника что это такое

Колонотерапия - как правильно очистить кишечник Очищающие клизмы с далее...

От алкоголя болит голова причины

Причины головной боли после алкоголя Нередко после продолжительных праздников далее...

Чем можно укрепить мочевой пузырь

Укрепление мочевого пузыря при недержании Недержание мочи у женщин далее...