Будьте здоровы!

Количественное определение вируса гепатита в методом пцр



ДНК вируса гепатита B, количественное определение

Что такое ДНК вируса гепатита B, количественное определение?

ВГВ является сложноорганизованным ДНК-содержащим вирусом и относится к семейству Hepadnaviridae роду Orthohepadnavirus.

Гепатит В - антропонозная инфекция, преимущественно с парентеральным механизмом заражения, которая может протекать в форме вирусного носительства, острой и хронической форм и характеризуется поражением печени с возможным развитием острой печеночной недостаточности, хронического гепатита, цирроза печени и первичного рака печени (гепатоцеллюлярной карциномы).

Инфицирование организма человека происходит при непосредственном проникновении HBV в кровь (при каких либо инвазивных вмешательствах и при переливании крови и ее препаратов), или через слизистые и кожные покровы во время родов, при половых и тесных бытовых контактах. Попав в печень, HBV проникает в гепатоцит, где начинает интенсивно размножаться.

Развитие инфекционного процесса может происходить двумя путями: репликативным и интегративным. Репликативная форма инфекции ведет к развитию острого или хронического гепатита и циррозу печени, тогда как интегративная - к развитию здорового вирусоносительства, неактивного хронического гепатита, циррозу печени и первичной гепатокарциномы.

Серологическая диагностика и прогноз HBV-инфекции основан на выявлении антигенов вируса и антител к нему. Но, как оказалось, в популяции вируса гепатита В встречается достаточно мутантных штаммов (HBеAg-негативных), которые не улавливаются обычными серологическими тестами. Поэтому метод ПЦР для диагностики HBV-инфекции является крайне важным.

Количественное определение ДНК вируса гепатита В методом ПЦР.

Аналитические показатели: выявление ДНК вируса гепатита В (hepatitis В virus) ме тодом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и определение вирусной нагрузки в плазме крови.

Определяемый фрагмент - уникальная последовательность ДНК гена структур ного белка вируса гепатита В. Специфичность определения - 98%. Чувствительность определения - от 2х105 МЕ/мл 5х103 копий/мл вирусных частиц в сыворотке крови.

Количественная характеристика содержания ДНК вируса гепатита важна для оценки эффективности противовирусной терапии и имеет прогностическое значение для опре деления хронизации гепатита В: при исходно низком уровне виремии (ДНК HBV менее 2х105 копий/мл (2х105 МЕ/мл)) процент хронизации острого гепатита В близок к нулю. При концентрации HBV ДНК от 2х105 копий/мл (2х105 МЕ/мл) до 2х10 копий/мл (8х105 МЕ/мл) хронизация процесса наблюдается у 25-30% больных, а при высоком уровне ви ремии у пациента (более 2х10 копий/мл (8х105 МЕ/мл)) острый гепатит В чаще всего пе реходит в хронический. Снижение концентрации ДНК вируса гепатита В к третьему дню от начала терапии на 85% является быстрым и точным параметром для предсказания эффективности терапии.

Вас что-то беспокоит? Вы хотите узнать более детальную информацию о ДНК вирусе гепатита B, количественном определении или других анализах? Или же Вам необходим осмотр врача? Вы можете записаться на прием к доктору – клиника Eurolab всегда к Вашим услугам! Лучшие врачи осмотрят Вас, проконсультируют, окажут необходимую помощь и поставят диагноз. Вы также можете вызвать врача на дом. Клиника Eurolab открыта для Вас круглосуточно.

Как обратиться в клинику:
Телефон нашей клиники в Киеве: (+38 044) 206-20-00 (многоканальный). Секретарь клиники подберет Вам удобный день и час визита к врачу. Наши координаты и схема проезда указаны здесь. Посмотрите детальнее о всех услугах клиники на ее персональной странице.

Если Вами ранее были выполнены какие-либо исследования, обязательно возьмите их результаты на консультацию к врачу. Если исследования выполнены не были, мы сделаем все необходимое в нашей клинике или у наших коллег в других клиниках.

Необходимо очень тщательно подходить к состоянию Вашего здоровья в целом. Есть много болезней, которые по началу никак не проявляют себя в нашем организме, но в итоге оказывается, что, к сожалению, их уже лечить слишком поздно. Для этого просто необходимо по несколько раз в год проходить обследование у врача. чтобы не только предотвратить страшную болезнь, но и поддерживать здоровый дух в теле и организме в целом.

Если Вы хотите задать вопрос врачу – воспользуйтесь разделом онлайн консультации. возможно Вы найдете там ответы на свои вопросы и прочитаете советы по уходу за собой. Если Вас интересуют отзывы о клиниках и врачах – попробуйте найти нужную Вам информацию на форуме. Также зарегистрируйтесь на медицинском портале Eurolab. чтобы быть постоянно в курсе последних новостей и обновлений информации на сайте о ДНК вирусе гепатита B, количественном определении и других анализах на сайте, которые будут автоматически высылаться Вам на почту.

Если Вас интересуют еще какие-нибудь анализы, диагностики и услуги клиник в целом или у Вас есть какие-либо другие вопросы и предложения – напишите нам. мы обязательно постараемся Вам помочь.

База знаний: HBV, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]

HBV, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]

Исследование для выявления возбудителя гепатита B (HBV), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется наличие генетического материала (ДНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце крови.

ДНК HBV может быть обнаружена в концентрации, находящейся за нижней границей линейного диапазона концентраций. Линейный диапазон концентраций – это диапазон, в котором можно точно посчитать количество копий возбудителя. Для данного анализа линейный диапазон концентраций ДНК HBV, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5×10 2 – 1,0×10 8 копий/мл образца .

Вирус гепатита В (ВГВ), количественное определение ДНК.

Hepatitis B Virus DNA, Quantitative, Real-Time PCR, Blood; HBV Viral Load; Hepatitis B Virus DNA Quant.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Копия/мл (копия на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Вирусный гепатит В (ВГВ) – инфекционное заболевание печени, вызванное ДНК-содержащим вирусом гепатита В (HBV). Среди всех причин развития острого гепатита и хронической вирусной инфекции вирус гепатита В считается одной из самых распространенных в мире. Действительное количество инфицированных неизвестно, так как у многих людей инфекция протекает без специфических симптомов и за медицинской помощью они не обращаются. Нередко вирус обнаруживают при проведении профилактических лабораторных исследований. По приблизительным подсчетам, в мире около 350 миллионов человек поражено вирусом гепатита В и ежегодно от его последствий умирает 620 тысяч. В России количество носителей HBV превышает 5 миллионов человек.

Источник инфекции – больной ВГВ или бессимптомный вирусоноситель. HBV передается с кровью и другими биологическими жидкостями. Заразиться можно при незащищенном половом контакте, использовании нестерильных шприцев, переливании крови и пересадке донорских органов, ребенка может заразить мать во время или после родов (через трещины в сосках). В группу риска входят: медицинские работники, у которых возможен контакт с кровью пациента, пациенты, получающие гемодиализ, инъекционные наркоманы, люди, ведущие беспорядочную половую жизнь, дети, рожденные от матерей с ВГВ.

Инкубационный период заболевания – от 4 недель до 6 месяцев. Вирусный гепатит В может протекать как в виде легких форм, длящихся несколько недель, так и в виде многолетней хронической инфекции. Основные признаки гепатита: желтушность кожных покровов, лихорадка, тошнота, утомляемость, в лабораторных анализах – нарушения функции печени и специфические антигены вируса гепатита В. Острое заболевание может быстро приводить к летальному исходу, переходить в хроническую инфекцию или заканчиваться полным выздоровлением. Считается, что после перенесенного ВГВ формируется стойкий иммунитет. Хронический вирусный гепатит В связан с развитием цирроза и рака печени.

Есть несколько специфических тестов для выявления существующего или перенесенного вирусного гепатита В. Для подтверждения наличия инфекции и уточнения периода заболевания используют определение антигенов вируса, антител к ним и ДНК вируса.

Полимеразная цепная реакция отличается высокой чувствительностью и специфичностью. Методом ПЦР можно определить ДНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита В в организме и его активное размножение. Количественное определение вирусной нагрузки позволяет оценить интенсивность развития болезни, эффективность проводимой терапии или развитие устойчивости к противовирусным препаратам.

Существует зависимость между концентрацией вируса в крови и исходом острого вирусного гепатита В. При низком уровне виремии вероятность перехода инфекции в хроническую форму близка к нулю, а инфицированный человек неопасен для окружающих. При высокой вирусной нагрузке ( 5 копий/мл) хронизация возникает часто и больной является потенциальным источником инфекции. Доказана связь между количеством ДНК вируса в сыворотке крови, присутствием HBeAg, повышенной АЛТ и развитием цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы (рака печени).

Эффективность противовирусной терапии оценивается по уменьшению количества ДНК вируса в крови. Через 3-6 месяцев после начала лечения вирусная нагрузка при адекватном терапевтическом ответе должна уменьшиться на 1-2 порядка. Отсутствие уменьшения количества вируса или его увеличение на фоне проводимого лечения требует пересмотра и изменения терапии.

Количественное определение ДНК вируса гепатита В совместно с клинической картиной заболевания и биохимическими показателями, маркерами инфекции, а также результатом пункционной биопсии печени позволяет дать прогноз заболевания и оценить необходимость противовирусной терапии.

Для чего используется исследование?

  • Для прогнозирования течения вирусного гепатита В.
  • Для подтверждения хронической формы вирусного гепатита В.
  • Для выявления носителей вирусного гепатита В и мониторинга активности размножения вируса.
  • Для выявления скрытых и мутантных штаммов вируса гепатита В.
  • Для оценки эффективности противовирусной терапии гепатита В и принятия решения о дальнейшей тактике лечения.

Когда назначается исследование?

  • При качественном обнаружении ДНК вируса гепатита В.
  • При остром и хроническом вирусном гепатите В.
  • При микст-гепатитах.
  • До и во время противовирусной терапии.

Что означают результаты?

  • Не обнаружено – ДНК вируса гепатита В не обнаружена или значение ниже предела чувствительности метода (200 копий/мл = 90 МЕ/мл).
  • 10^5 копий/мл (2*10^4 МЕ/мл) – высокая вирусная нагрузка, активный инфекционный процесс (необходимо проведение противовирусной терапии).
  • 1,0*10^8 копий/мл ( 4,8*10^7 МЕ/мл) – ДНК вируса гепатита В обнаружена в концентрации выше линейного диапазона концентраций.

Линейный диапазон концентраций ДНК вируса гепатита В, определяемых детектирующим амплификатором, составляет 7,5*10^2 – 1,0*10^8 копий/мл (3.6*10^2 – 4,8*10^7 МЕ/мл).

Что может влиять на результат?

  • Количественное определение ДНК вируса гепатита В является обязательным исследованием до назначения противовирусной терапии. Во время курса лечения анализ необходимо повторить через 3-6 месяцев.
  • Вирусный гепатит В нередко сочетается с вирусным гепатитом D.

Кто назначает исследование?

  1. Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3х т. - К. Здоровье, 2000 – Т.1. 601-654.
  2. Chan Henry Lik-Yuen, Wong May Ling, and others. Use of Hepatitis B Virus DNA Quantitation To Predict Hepatitis Be Antigen Reversion in Cases of Chronic Hepatitis B. J Clin Microbiol. 2003 October; 41(10): 4793–4795. PMCID: PMC294957
  3. Harrison's Principles of Internal Medicine. 16 th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
  4. Management of Hepatitis B. An NIH Consensus Development Conference. Program and Abstracts. October 20–22, 2008.

МЕДИЦИНСКИЕ АНАЛИЗЫ

( 831 ) 412-96-23

Количественное определение вирусного гепатита В методом ПЦР в режиме «реального времени».

Молекулярно-биологические методы диагностики.

Диагностическая значимость качественных методов обнаружения ДНК HBV.

Выявление ДНК HBV используется для:

1) ранней диагностики острого вирусного гепа­тита В. ДНК HBV появляется в крови в среднем через месяц после инфицирования и является первым диагностическим маркером. HBsAg появляется в крови заболевшего как минимум на 3 недели позже;

2) выявления скрытых форм вирусного гепатита В. HBsAg в сыворотке таких инфицированных не выявляется, а ДНК HBV - выявляется в плаз­ме крови или ткани печени при использовании высокочувствительных ПЦР тест-систем;

3) выявления мутантных по HBsAg штаммов вируса гепатита В. Ввиду массовых программ вакцинации наблюдается тенденция к возрас­танию частоты таких штаммов. Эти штаммы могут не выявляться методом ИФА и легко об­наруживаются с помощью ПЦР тест-систем.

Диагностическая значимость количественной оценки уровня ДНК HBV в плазме крови:

1) установление диагноза хронического вирус­ного гепатита В.

Персистенция HBsAg более 6 месяцев, повышенный уровень трансаминаз, гистологические признаки выраженного гепа­тита (индекс активности 4) и концентрация ДНК HBV более 10 5 копий ДНК/мл (2*10 4 МЕ/мл), для НВеАg - положительных пациентов или 10 4 копий ДНК/ мл для НВеАg - отрицательных пациентов по­зволяют поставить диагноз хронический гепатит В , требующий соответствующего лечения. Более низкая концентрация вируса и нормаль­ный уровень трансаминаз свидетельствуют в пользу неактивного носительства вируса, тре­бующего динамического наблюдения без не­обходимости противовирусного лечения;

2) мониторинг эффективности противови­русной терапии.

Количественное исследо­вание ДНК вируса гепатита В в плазме крови является обязательным перед назначением противовирусного лечения для определения показаний к нему и в процессе лечения для оценки его эффективности (каждые 3 - 6 меся­цев). Повышение вирусной нагрузки в 10 раз от минимального значения является признаком возникновения устойчивости у вируса к дан­ному лекарственному препарату;

3) мониторинг активности вирусной реплика­ции у носителей HBsAg.

НВsAg – положительным пациентам, которые не удовлетворяют в данный момент всем критериям хронического вирусного гепатита В и которым не показано противовирусное лечение, рекомендуется следующее динамическое наблюдение:

а) HBsAg-позитивным, НВеАg-позитивным пациентам с нормальным уровнем аланин-трансаминаз (ALT) рекомендуется исследо­вание уровня ALT каждые З-6 месяцев;

НВеАg тестируется каждые 6 -12 месяцев.

При повы­шении уровня ALT производится количествен­ное определение ДНК HBV. Для пациентов, у которых вирусная нагрузка более 10 5 копий ДНК/мл и уровень ALT сохраняется повышенным (но не более чем в 2 раза от нормального значения) в течение З-6 месяцев, или вирусная нагруз­ка более 10 5 копий ДНК/мл и возраст пациента более 40 лет, рекомендуется биопсия печени. Если биопсия показала умеренное/тяжелое вос­паление или значительный фиброз, то этим пациентам рекомендовано противовирусное лечение. Для пациентов, у которых вирусная нагрузка более 10 5 копий ДНК/мл и уровень ALT со­храняется повышенным (более чем в 2 раза от нормального значения) в течение З-6 месяцев, рекомендовано противовирусное лечение;

б) HBsAg-позитивным, НВеАg - негативным па­циентам с нормальным уровнем ALT и низкой вирусной нагрузкой ( 4 копий ДНК/мл) рекомен­дуется исследование уровня ALT каждые 3 месяца в течение одного года, и каждые 6 -12 месяцев в последующие годы.

Если уровень ALT повышается (но не более чем в 2 раза от нормального значения), то рекомендуется оп­ределение вирусной нагрузки. Для пациентов, у которых вирусная нагрузка

10 4 – 10 5 копий ДНК/мл и уровень ALT сохраняется повышенным (но не более чем в 2 раза от нормального значения) в течение 3 месяцев, рекомендуется биопсия печени. Если биопсия показала умеренно/тяжелое воспаление или значительный фиброз, то этим пациентам рекомендовано противо­вирусное лечение. Для пациентов, у которых вирусная нагрузка более 10 5 копий ДНК/мл и посто­янно повышенный уровень ALT (более чем в 2 раза от нормального значения), рекомендо­вано противовирусное лечение.

Материал подготовлен: МЦ Наследственность г. Нижний Новгород, май 2008 г. Согласно Инструкции по применению тест – системы для количественного определения ДНК вируса гепатита В методом ПЦР в режиме реального времени ; Москва, 2008 г. ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора.

Источники: http://www.eurolab.ua/services/257, http://www.helix.ru/kb/item/548, http://www.nasled.com/?id=279




Комментариев пока нет!

Поделитесь своим мнением

Сумма цифр: код подтверждения

Интересное на сайте

Диета при газообразование в кишечнике

Повышенное газообразование в кишечнике, или как бороться далее...

Сколько дней пить де нол при гастрите

Как принимать Де-Нол? Де-Нол #8212; противоязвенный препарат с далее...

Чем промывают кишечник перед колоноскопией

Подготовка к колоноскопии Если вы переживаете по далее...

Наиболее читаемое

Что пить при остром гастрите

Лечение острого гастрита Универсальных препаратов, способных мгновенно вылечить далее...

Какой гепатит с самый опасный

Какой гепатит самый опасный #8212; виды заболеваний печени, далее...

Болит живот подташнивает голова болит

Третий день тошнота, головная боль и боль далее...